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白介素試劑盒
名稱 白介素試劑盒
型號
報價
特點 白介素試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。特異性抗人IL-6單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品和檢測樣本,經過孵育,樣本中存在的IL-6與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后,加入生物素化的單克隆抗體,孵育。}
  • 詳細內容

一.人白介素試劑盒檢測原理:

人白介素6ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。特異性抗人IL-6單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品和檢測樣本,經過孵育,樣本中存在的IL-6與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后,加入生物素化的單克隆抗體,孵育。洗滌去除未結合的生物素抗體,加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(S-HRP)。洗滌,加入顯色底物TMB,避光顯色。終止液終止反應,在450 nm波長(參考波長570-630 nm)測定吸光度值。顏色反應的深淺與樣本中IL-1α的濃度成正比。

二.人白介素試劑盒樣本采集與貯存

細胞培養上清 沉淀之后即刻檢測, 或者分裝,-20℃貯存。避免反復凍融。

血清樣本 分離管分離血清。在1000 g離心之前,使血樣凝集30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測,或者分裝,-20℃貯存。避免反復凍融。

 

血漿樣本 EDTA,枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。在血樣收集 30分鐘內離心收集樣本。即刻檢測,或者分裝,-20℃貯存。避免反復凍融。 本試劑盒可能適用于其它生物學樣本。

注意:檢測前,樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。 樣本應該被分裝并貯存于-20℃,以避免人白介素6ELISA試劑盒活性的丟失。如果在24小時內檢測,樣本可以存放在2-8℃。 避免樣本的反復凍融。在分析前,冷凍樣本應該緩慢的恢復至室溫,輕柔地混勻。

三.檢測步驟:

1. 準備好所有需要的試劑及工作濃度標準品。 2. 將不需要的板條拆卸下來,放回裝有干燥劑的鋁箔袋,重新封好封口。 3. 300 μl洗液洗板兩次,加入300 μl洗液靜置浸泡15分鐘。為了獲得理想的實驗結果浸泡是必須的。棄掉洗液之后,在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后,請立即使用微孔板,不要讓微孔板干燥。 4. 每孔加入50 μl檢測緩沖液。 5. 加入50 μl的標準品,樣本和對照品。保證連續加樣,請不要間斷。加樣過程在15分鐘內完成。 6. 每孔加入50 μl檢測抗體。 7. 使用封板膜封板。100轉/分鐘振蕩,室溫孵育2小時。8. 棄掉液體,每孔加入300 μl洗液洗板,洗滌6次。每次洗板,在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能,必須徹底移除殘留液體。 9. 每孔加入100 μl辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。 10. 使用新的封板膜封板。100轉/分鐘振蕩,室溫孵育45分鐘。 11. 重復步驟8。 12. 每孔加入100 μl顯色底物TMB,避光,室溫孵育10-30分鐘。 13. 每孔加入100 μl終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻,請輕輕叩擊板框,充分混勻。 14. 人白介素6ELISA試劑盒使用的檢測儀器,在30分鐘之內,酶標儀450 nm波長測定OD值。如果能夠進行雙波長檢測,參考波長設定為570 nm或者630 nm。如果不能雙波長檢測,請用450 nm的測定值減去570 nm或630 nm的測定值。僅使用450 nm測定會導致OD值偏高,并且準確度降低。

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